edgeR中怎么实现两组间差异分析操作
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1. 读取文件
需要读取基因在所有样本中的表达量文件,示例如下
gene_id ctrl-1 ctrl-2 ctrl-3 case-1 case-2 case-3 geneA 14 0 11 4 0 12 geneB 125 401 442 175 59 200
每一行为一个基因,每一列代表一个样本。读取数据的代码如下
# 读取表达量的表格 counts <- read.table( "gene.counts.tsv", header=T, sep="\t", row.names=1, comment.char="", check.names=F) # 设置样本分组 groups <- factor(c(1,1,1,2,2,2)) # 构建edgeR中的对象 y <- DGEList(counts=count,group=group)
2. 过滤count数很低的基因
根据CPM
表达量对基因进行过滤,代码如下
keep <- rowSums(cpm(y)>1) >= 2 y <- y[keep, , keep.lib.sizes=FALSE]
3. 归一化
默认采用TMM
归一化算法,计算每个样本的 sizefactor, 代码如下
y <- calcNormFactors(y)
4. 进行差异分析
代码如下
design <- model.matrix(~group) y <- estimateDisp(y,design) et <- exactTest(y)
5. 提取结果
将差异分析的结果保存到文件中,代码如下
res <- et$table write.table(res, "edgeR.xls", header = T, col.names = NA, sep = "\t" )
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